**文章标题:** 大规模生产全细胞生物墨水的方法探讨 **作者:** Debbie L. Ho等人

本文揭示了通过优化人诱导多能干细胞（hiPSCs）聚集体在自动化生物反应器中的悬浮培养条件，实现大规模生产全细胞生物墨水的可能性，为3D生物打印技术的进步提供了重要支持。当前，类器官的构建多依赖于手工操作，面临着质量控制与扩展规模的多重挑战。借助自动化的生物3D打印技术，我们有望实现类器官的批量、稳定化构建。通过生物3D打印，科研人员能够以极少的样本量快速探索不同变量对模型的影响，显著提升了研究效率并降低了成本。

hiPSCs因其能够分化为多种细胞类型并自发形成3D聚集体，因而在3D生物打印中展现出巨大的潜力。自动化搅拌罐生物反应器适合细胞的大规模生产，能够为生物打印提供理想的细胞来源。

**研究方法:** 在250 mL生物反应器中培养SCVI-1 hiPSCs，深入研究叶轮转速对细胞生长的多方面影响，包括聚集体直径、细胞密度和多能性标记物的表达（使用NovoCyte Quanteon流式细胞仪分析）。结果表明，200 RPM的恒定叶轮转速能够生成最大比例的理想直径的聚集体，且细胞密度和多能性标记物的表达均达到高水平，细胞活力显著增强。通过多变量数据分析（MVDA）进一步确认了这一条件的优越性。

**连续传代培养:** 使用WTC-11和SCVI-15细胞系进行了三次连续传代实验。结果显示，在生物反应器中，聚集体的生长速率和形态一致，多能性得以维持，但部分SCVI-15细胞出现了1q重复的染色体异常。

**培养规模的放大研究:** 利用自动化生物反应器系统成功将培养规模放大至1L，实验结果显示，细胞生长速率、形态与多能性标记物的表达与250 mL培养相似，且部份细胞同样表现出1q重复现象。这些数据支持了在大规模生产中，hiPSC聚集体的生长和特性的一致性。

**研究结论:** 本研究开发出了一种高效的从250 mL到1L规模培养hiPSCs聚集体的流程，结合生物打印与目标细胞类型分化的理念，明确了最佳生长条件，并验证了细胞在多次传代及大规模培养中的稳定性。研究结果证明了hiPSC聚集体作为生物墨水的可打印性和有效的分化潜力。

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